近日，成都新百基生物科技有限公司技術(shù)人員在對病毒核酸提取試劑盒進(jìn)行質(zhì)量檢測。新華社記者 劉坤 攝

國家藥品監(jiān)督管理局（以下簡稱國家藥監(jiān)局）網(wǎng)站顯示，根據(jù)《醫(yī)療器械應(yīng)急審批程序》，目前已有7個(gè)新冠病毒核酸檢測試劑經(jīng)過應(yīng)急審批。近日，有報(bào)道稱，北京中日友好醫(yī)院出現(xiàn)一名三次咽拭子檢測均為陰性、通過檢測下呼吸道樣本才確診為新冠肺炎的患者。

為什么核酸檢測結(jié)果會出現(xiàn)假陰性？不同企業(yè)的試劑檢測產(chǎn)品有何異同？

擴(kuò)增讓新冠病毒現(xiàn)形

大多數(shù)生物體的遺傳物質(zhì)是DNA，只有少數(shù)病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，例如這次的新冠病毒。為了知道人體內(nèi)是否含有新冠病毒，需要采集人體樣本進(jìn)行檢測。根據(jù)《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》，在鼻咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液、糞便等標(biāo)本中可檢測出新冠病毒的RNA。

但實(shí)際上，樣本中病毒的遺傳物質(zhì)極其微量。而且與DNA相比，RNA極易降解。問題來了，樣本中的RNA病毒量少又不穩(wěn)定，怎樣才能逼這只妖怪“現(xiàn)形”呢？

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR技術(shù)）就是“照妖鏡”。該技術(shù)能將病毒的RNA合成為DNA，然后對合成DNA進(jìn)行擴(kuò)增，再通過熒光探針檢測這些擴(kuò)增產(chǎn)物。熒光探針就像雷達(dá)一樣，一旦鎖定目標(biāo)就會發(fā)出信號。

擴(kuò)增產(chǎn)物越多，累積的熒光信號就越強(qiáng)。核酸檢測就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸。目前，獲批的新冠病毒核酸檢測試劑使用的均是RT-PCR技術(shù)。

中國工程院院士、清華大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程系講席教授程京接受科技日報(bào)記者采訪時(shí)表示，除RT-PCR這一熱循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)之外，等溫核酸序列擴(kuò)增技術(shù)（NASBA技術(shù)）和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP技術(shù)）等恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)也在分子診斷領(lǐng)域中扮演著重要角色。

“目前，獲批的核酸檢測試劑產(chǎn)品都是單一指標(biāo)的，即只能用于檢測新冠病毒這一種病毒。”程京坦言，對于大量疑似病人來說，這類檢測試劑作用有限，臨床上急需能一次性檢測多個(gè)病原體的檢測試劑產(chǎn)品。

審批從簡但該有的流程不會少

為應(yīng)對突發(fā)的新冠肺炎疫情，國家藥監(jiān)局迅速啟動醫(yī)療器械應(yīng)急審批程序，加快審評審批速度，擴(kuò)大新冠病毒核酸檢測試劑供給。在獲取新冠病毒RNA序列后，多家企業(yè)在短短幾天內(nèi)迅速生產(chǎn)出檢測試劑產(chǎn)品，并很快獲批以供應(yīng)前線需求。

南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)系教授楊蓉西撰文稱，正常情況下，核酸檢測試劑從研發(fā)到臨床再到拿證需要3—5年，甚至更長。但緊急情況下，簡化流程符合需要。“質(zhì)量檢和正式臨床試驗(yàn)可以暫時(shí)不做，但是基本的研發(fā)流程，少量的預(yù)臨床試驗(yàn)，以及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)都是需要的。”

2月8日，在國務(wù)院聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制召開的新聞發(fā)布會上，國家藥監(jiān)局器械注冊司稽查專員江德元對有關(guān)核酸檢測試劑有效性的質(zhì)疑作出回應(yīng)。他表示，已批準(zhǔn)的產(chǎn)品都有相應(yīng)的臨床使用實(shí)驗(yàn)，完成了產(chǎn)品的注冊檢驗(yàn)，質(zhì)量管理體系檢查，提交了臨床評價(jià)資料和相應(yīng)的研究資料，經(jīng)過嚴(yán)格的審批程序。相關(guān)資料表明，產(chǎn)品性能能夠達(dá)到技術(shù)要求的規(guī)定，產(chǎn)品安全性、有效性和質(zhì)量可靠性可以得到保障。

程京也告訴記者：“檢測試劑還要通過3家以上獨(dú)立醫(yī)學(xué)機(jī)構(gòu)的臨床樣本檢測并出具臨床試驗(yàn)報(bào)告。中國食品藥品檢定研究院也會測試產(chǎn)品性能，給出鑒定報(bào)告，判定檢測試劑產(chǎn)品是否滿足安全性、可靠性、有效性。滿足不了這些硬性指標(biāo)，檢測試劑在實(shí)驗(yàn)室的效果再好，也不會拿到注冊批文。”

也就是說，雖然特事特辦，但國家藥監(jiān)局還是遵循“統(tǒng)一指揮、早期介入、隨到隨審、科學(xué)審批”的原則，確保產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控。

多種因素導(dǎo)致檢測結(jié)果有偏差

有疫情一線的醫(yī)生反映，一些患者核酸檢測結(jié)果為陰性，但CT影像卻顯示為新型冠狀病毒肺炎，病情也在不斷發(fā)展。

“當(dāng)前，用核酸檢測新冠肺炎敏感性即陽性率只有30％—50％，假陰性帶來的漏檢是個(gè)大問題。”丹娜（天津）生物科技有限公司首席科學(xué)家周澤奇告訴科技日報(bào)記者。

為何核酸檢測結(jié)果會出現(xiàn)假陰性？

程京在采訪中表示，這可能由多種因素導(dǎo)致。“首先，試劑盒研發(fā)需要十幾種關(guān)鍵化學(xué)原材料，比如酶、合成DNA等。不同企業(yè)選擇的原材料供貨方不同，酶的活性、DNA的純度就會有差別，這都會影響到核酸檢測試劑的準(zhǔn)確度。”程京說。

“而在試劑盒產(chǎn)品研發(fā)過程中，原材料制備、生產(chǎn)工藝選擇、研發(fā)人員能力、技術(shù)手段使用，每一個(gè)環(huán)節(jié)都有可能產(chǎn)生偏差，誤差累計(jì)起來也會導(dǎo)致試劑盒產(chǎn)品靈敏度出現(xiàn)差別。”程京說。

再者，取樣過程不規(guī)范也會影響后續(xù)的分離和測定結(jié)果。以使用最普遍、操作簡單的咽拭子采集為例，由于咽部的新冠病毒含量少，所以有可能造成漏檢。“雖然只是在咽部拿棉簽劃幾下，但如果沒有良好的專業(yè)實(shí)操技能，樣本的采集部位和手法可能不符合規(guī)范，就可能直接影響檢測結(jié)果。”程京表示，此外，剛被感染的病人因體內(nèi)帶毒數(shù)量有限，也可能出現(xiàn)檢測結(jié)果為陰性。

送樣本時(shí)必須采取冷鏈運(yùn)輸，如果在運(yùn)送過程中樣本受損，也會影響檢測結(jié)果。

核酸檢測出現(xiàn)假陰性的問題，一度引發(fā)用CT影像代替核酸檢測試劑確診新冠肺炎的呼聲。近日發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》中，在“疑似病例”和“確診病例”之外新增了一個(gè)“臨床診斷病例”，并將“疑似病例具備肺炎影像特征者”作為其診斷標(biāo)準(zhǔn)（只限于湖北省之內(nèi)），這也意味著CT影像結(jié)果成了“臨床診斷病例”的判定依據(jù)。

浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院放射科主任醫(yī)師、中國醫(yī)師協(xié)會放射醫(yī)師分會呼吸專委會主任委員張敏鳴教授曾指出，CT影像結(jié)果陽性也存在誤診可能。他還提到，如果都去做CT檢查而忽略防護(hù)，容易造成交叉感染。專家表示，無論是CT檢查還是核酸檢測，都不能保證絕對的準(zhǔn)確性。

“盡管核酸檢測存在假陰性問題，但核酸檢測是病原診斷的一個(gè)依據(jù)，也是目前確診的最重要依據(jù)。”國家醫(yī)療專家組成員、北京大學(xué)第一醫(yī)院感染疾病科主任王貴強(qiáng)表示。

（原標(biāo)題 新冠病毒核酸檢測出現(xiàn)假陰性 到底是什么影響了準(zhǔn)確率）

[責(zé)任編輯：楊凡、武云泉]

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